Metoda izolace DNA může ovlivnit stupeňpreferenční amplifikace alel polymerázovouřetězovou reakcí

Overview

Polymerázová řetězová reakce je dnes běžnou součástí postupů sloužících k identifikaci osobv soudním lékařství. Tato metoda je jednoduše proveditelná, pozornost však vždy musí být věno-vána optimalizaci reakčních podmínek a interpretaci výsledků. Z literatury jsou známy případy,kdy při amplifikaci extrémně malého množství DNA (např. z jediné buňky) došlo během polymerá-zové řetězové reakce k preferenčnímu namnožení jen jedné ze dvou v templátové DNA přítom-ných alel. Pokud se amplifikované fragmenty liší délkou, dochází k preferenční amplifikaciu kratšího z nich, což může být příčinou zavádějících výsledků. V prezentované práci bylo 23skvrn mužské krve na různých textilních materiálech podrobeno izolaci DNA dvěmi různýmimetodami (pomocí proteinázy K a povaření a pomocí Chelexu 100). Získaná DNA byla amplifiko-vána za použití primerů komplementárních k sekvencím genu pro amelogenin. Systém je vhodnýpro určení pohlaví jedince, neboť namnožením X chromosomální sekvence poskytuje fragmento délce 632 bp, amplifikací Y chromosomální sekvence fragment o délce 443 bp. Izolační metodavyužívající proteinázy K vedla v 17,38 % vzorků k velmi intenzivní preferenční amplifikaci delšíalely a tím k nesprávnému výsledku. Izolační metoda založená na působení Chelexu 100 poskytlavždy správný výsledek s jasně patrnou preferenční amplifikací kratší alely. Uvedené výsledkypodtrhují důležitost volby vhodné izolační metody, nutnost pečlivé optimalizace PCR a opatrnéinterpretace jejích výstupů.

Klíčová slova:
polymerázová řetězová reakce (PCR) - izolace DNA - identifikace osob - preferenčníamplifikace