Elektroforetická analýza (SDS PAGE) ovulačního cervikálního hlenu pacientek s poruchou fertility a po neúspěšné IVF

Download PDF English version

Authors: J. Cibulka ¹; Z. Ulčová-Gallová ²; K. Babčová ¹; V. Krauz ³; M. Balvín ³; K. Bibková ²; Z. Mičanová ²; Z. Rokyta ²
Authors‘ workplace: Lékařská fakulta UK, Plzeň ¹; Gynekologicko-porodnická klinika LF UK a FN, Plzeň, přednostka doc. MUDr. Z. Ulčová-Gallová, DrSc. ²; Ústav soudního lékařství LF UK, Plzeň ³
Published in: Ceska Gynekol 2005; 70(5): 331-335
Category: Original Article

Overview

Cíl studie:
Stanovení antispermatozoálních protilátek (ASA) a elektroforetická analýza (SDS PAGE) cervikálního ovulačního hlenu (OCM), za účelem porovnání výsledků Kremerova penetračního testu (mucus sperm capillary penetration test) a nepřímého MAR (indirect mixed antiimmunoglobulin reaction) testu s elektroforetickou analýzou SDS PAGE.

Typ studie:
Retrospektivní studie.

Název a sídlo pracoviště:
Gynekologicko-porodnická klinika LF UK a FN Plzeň.

Soubor a metodika:
Do studie jsme zařadili 94 pacientek (22–40 let, průměrný věk 32,3 roku), kterým jsme v Poradně reprodukční imunologie Gynekologicko-porodnické kliniky LF UK v Plzni odebrali ovulační cervikální sekret (OCM). V OCM jsme vyšetřovali antispermatoidní protilátky (ASA) pomocí Kremerova testu a nepřímého MAR-testu pro IgG, IgA, IgM a IgE. Pro polyakrylamidovou gelovou elektroforézu (PAGE) jsme připravili OCM inkubací se vzorkovým pufrem s obsahem denaturačního činidla (SDS) a sledovali jednotlivé bílkovinné frakce.

Výsledky:
Penetrace spermií v kapilárách naplněných ovulačním hlenem (Kremer test) dosahovala hodnot od 0 do 10 cm za hodinu (průměrná hodnota u žen bez ASA 2,43 cm/hod., u pacientek s ASA pak 1,4 cm/hod.). Výskyt spermaglutinačních protilátek nad 45 % v IgA jsme prokázali u 6 (6,38 %) pacientek, v IgG u 5 (5,32 %), u 5 žen (5,32 %) jsme zjistili sperm-cytotoxické protilátky, přítomnost IgE jsme našli ve 3 případech (3,19 %) do 30%, IgM aktivitu vůbec. Individuální spektra bílkovin získaných metodou SDS PAGE vykazovala hodnoty molekulových hmotností v rozsahu 14,4–350 kDa. Metodou SDS PAGE jsme zachytili přítomnost protilátek v IgG a /nebo v IgA v 53 případech (56,38 %): u 40 (75,47 %) jsme neprokázali jejich ASA aktivitu i-MAR testem, u 13 ano (24,53 % korelace s i-MAR testem); 6 ASA pozitivních pacientek (31,58 %) metoda neodhalila.

Závěr:
Analýza 94 OCM metodou SDS PAGE ukázala některé signifikantní korelace, jejichž specifikace bude založena na dalším výzkumu typu immunoblottingu.

Klíčová slova:
ovulační cervikální hlen, sterilita, IVF, SDS PAGE