Authors: L. Zahradová 1,2; D. Očadlíková 1; L. Kovářová 1,3; R. Hájek 1,2; A. Buliková 3; M. Penka 3; J. Michálek 1,4 Authors‘ workplace: Laboratoř experimentální hematologie a buněčné imunoterapie (LEHABI), FN Brno, Bohunice, 2Interní hematoonkologická 1; klinika, FN Brno - Bohunice, 3Oddělení klinické hematologie, FN Brno - Bohunice, I. dětská interní klinika, FN Brno, Dětská nemocnice 4 Published in: Transfuze Hematol. dnes,12, 2006, No. 4, p. 244-248. Category: Comprehensive Reports, Original Papers, Case Reports
Východiska: K průkazu cytotoxického efektu T lymfocytů vůči cílovým, resp. nádorovým buňkám, je standardně používán in vitro test s radioaktivním chromem 51Cr. Tento test má však určité limitace, zejména vysoké procento nespecifického pozadí, nízkou citlivost a použití radioaktivních materiálů. Vědomi si těchto limitací zavedli jsme neradioaktivní cytotoxický test s využitím fluorochromu 5-(6-) karboxyfluorescein diacetát sukcinimidyl esteru (CFSE) a propidium iodidu.
Obsah a cíle práce: Cílem práce bylo ověřit cytotoxický efekt protinádorových T lymfocytů neradioaktivním testem.
Metody: Ve studii byl použit model specifických T lymfocytů cytotoxických vůči nádorové linii buněk mnohočetného myelomu ARH 77. Specifické cytotoxické T lymfocyty byly získané imunomagnetickou separací na základě produkce interferonu gama a expandované na potřebné množství. T lymfocyty byly barveny CFSE a kultivovány s nádorovými buňkami ARH 77, pozdně apoptotické a nekrotické buňky byly odlišeny barvením propidium jodidem a hodnoceny pomocí průtokové cytometrie.
Výsledky: Nejprve byla nalezena optimální barvicí koncentrace CFSE (1μM). Cytotoxicita byla hodnocena při poměru efektorové:terčové buňky 2 : 1, 10 : 1 a 50 : 1 a to po 4, 24 a 48 hodinách kultivace. Specificita expandovaných T lymfocytů byla ověřena kultivací s alogenními mononukleárními buňkami a kultivací nespecifických T lymfocytů s buňkami nádorové linie ARH 77.
Závěr: Takto zavedený test cytotoxicity je cenným nástrojem pro hodnocení efektorové složky imunitního systému a účinnosti protinádorových vakcín.
Klíčová slova: test cytotoxicity, CFSE, cytotoxické T lymfocyty
Don‘t have an account? Create new account
Enter the email address that you registered with. We will send you instructions on how to set a new password.
