Vyšetření genotypu HCV pomocí kombinace testu Cobas Amplicor HCV 2.0 a reverzní hybridizace Versant HCV Genotype Assay

Overview

Genotypizace viru hepatitidy C /HCV)má význam zejména pro stanovení schématu léčby pacientů s chronickou VHC a pro prognózu úspěšnosti léčby. U souboru 62 sér pozitivních na HCV RNA v testu Cobas Amplicor HCV 2.0 (CA) byl zjišťován genotyp HCV metodou reverzní hybridizace (Versant HCV Genotype Assay (LiPA) Bayer), modifikovanou tím způsobem, že jako výchozí amplifikovaný materiál pro reakci byl použit přímo produkt CA. Z 57 vzorků (92 %) reaktivních v reverzní hybridizaci byl u 56 určen genotyp. U jednoho vzorku neodpovídal profil žádnému určitému genotypu, pět vzorků bylo nereaktivních a jeden nebyl v tomto uspořádání testován. U dvou z těchto 5 nereaktivních a u jednoho netestovaného séra byl určen genotyp reverzní hybridizací vycházející z nested PCR. Lze shrnout, že produkt získaný po jednostupňové amplifikaci HCV RNA v testu CA je pro většinu vzorků vhodným výchozím materiálem pro genotypizaci reverzní hybridizací. Pro laboratoře používající k detekci HCV RNA v séru Cobas Amplicor HCV 2.0 by tento postup vedl ke zjednodušení genotypizace a k časové a materiálové úspoře. U sér s nižší koncentrací viru, která nejsou typizovatelná touto kombinací metod, lze vycházet z nested PCR. Čtyřicet osm vybraných vzorků bylo typizováno vedle reverzní hybridizace také sérologicky soupravou Murex HCV Serotyping 1–6 Assay (Abbot Murex). Typ byl určen u 37 ze 48 testovaných sér (77 %) včetně všech tří sér negativních v reverzní hybridizaci. Přestože je sérologická typizace méně citlivá, může být významná při typizaci některých sér s nízkou hladinou HCV RNA a sér neobsahujících již detekovatelnou virovou NK, která nejsou typizovatelná reverzní hybridizací. U 33 sér, jež byla genotypovatelná oběma metodami, byly tyto metody ve vzájemné shodě. Pouze ve dvou případech zjistila sérologická metoda přítomnost jednoho typu viru navíc (smíšený genotyp) oproti reverzní hybridizaci.

Klíčová slova:
genotypizace HCV – reverzní hybridizace – sérotypizace.