„Nested“ PCR a jej využitie pri detekciia typizácii papilomavírusovej infekcievo vzorkách z cervikálnych léziígynekologických pacientok

Cieľ štúdie:
Autori testovali variant polymerázovej reťazovej reakcie (PCR) –⁠ „nested“ (N-PCR)na detekciu ľudského papilomavírusu (HPV) vo vzorkách cervikálnych sterov u gynekologickýchpacientok. Táto metodika je založená na opakovanej amplifi kácii špecifi ckých úsekov DNA vírusu.Porovnávali citlivosť N-PCR s používanou hybridizačnou metodikou. Pozitívne vzorky v druhejčasti pokusov použili na typizáciu detekovaných HPV-DNA pomocou PCR.Súbor: Účinnosť N-PCR pri detekcii HPV overili na 30 vzorkách z cytologicky/histologicky suspektnýchcervikálnych lézií, kde bola predchádzajúca detekcia HPV hybridizačnou metódou neúspešná.Druhý súbor tvorilo 21 vzoriek odobratých po konizácii, u ktorých sa hybridizačnou metódou prítomnosťHPV pred zákrokom potvrdila, ale po operácii hybridizácia HPV-DNA bola negatívna.Výsledky: „Nested“ PCR detekovala prítomnosť HPV-DNA vo všetkých 30 vzorkách (100 %) z prvéhosúboru a v 8 vzorkách (38 %) získaných po konizácii.V 20 prípadoch z prvej série bol typovo-špecifi ckou PCR dokázaný vírus HPV 16, v 6 prípadochHPV 18, vo zvyšných 4 prípadoch typizácia zameraná na HPV 16, 18, 31, 33 nebola úspešná. Vovšetkých 8 vzorkách, kde sa pomocou N-PCR preukázala prítomnosť HPV-DNA po konizácii, satypovo-špecifi ckou PCR detekoval HR-HPV 16.Záver: „Nested“-PCR je v súčasnosti pravdepodobne najcitlivejšou metodikou na detekciu HPV.Nevýhodou je pomerne zložitý metodický postup a nároky na prístrojové a personálne vybavenielaboratórií, schopných rutinne využívať túto metodiku.

Klíčová slova:
nested PCR, HPV, detekcia, typizácia