Zkušenosti se zavedením a využitím virus-neutralizačního testu SARS-CoV-2

Overview

Úvod: Jednou z mála možností specifické léčby COVID je podání kovalescentní plazmy s neutralizačními protilátkami proti SARS-CoV-2 pacientům se závažným průběhem onemocnění. Dostatečná hladina protilátek schopných efektivně blokovat infekční schopnosti viru je klíčová pro úspěšnost léčebného postupu. Vyšetřování hladin protilátek proti danému agens neutralizačním testem je zlatým standardem v sérologii virů a výsledek slouží pro výběr vhodných dárců.

Materiál a metodika: Principem virus neutralizačního testu (VNT) je inhibice cytopatického působení viru na buňky díky přítomnosti neutralizačních protilátek ve vzorku. Pro test in vitro se používají tkáňové kultury buněk vnímavých k infekci a virus SARS-CoV-2. Jedná se o funkční biologický test s odpovídajícími nároky na provedení a čas. Práce s infekčním virem SARS-CoV-2 je omezena na prostředí laboratoře s úrovní zabezpečení BSL3. Pro test jsme použili klon E6 buněčné linie VERO, který vykazuje cytopatický efekt po infekci virem a virus S007 izolovaný během letošní pandemie o titru 200násobně vyšším než infekční dávka TCID₅₀. Při provedení testu se nejprve smísí vzorek v různých ředěních se suspenzí viru a po inkubaci očkuje na buněčnou kulturu.

Výsledky: VNT byl zaveden v laboratoři BSL3 v Těchoníně a doposud bylo vyšetřeno přes 200 vzorků. Předběžné výsledky ukazují na obecně nízké titry virus-neutralizačních protilátek u většiny pacientů, kteří prodělali COVID a naznačují též jejich rychlý pokles.

Závěr: Metoda je použitelná pro rutinní testování virus neutralizačních protilátek. Jedná se však o biologický test s relativně malou kapacitou počtu vyšetřovaných vzorků, který probíhá 5 dnů. Je třeba hledat možné korelace, např. s ELISA stanovením specifických protilátek a také důvody nízké protilátkové odpovědi na COVID.